Promothiocin A及びBは培養菌体アセトン抽出物より酢酸エチル抽出、シリカゲル及びSephadex LH-20のカラムクロマトグラフィー、シリカゲルTLCなどを行って単離した。Promothiocin A、Bは共に白色粉末で、高分解能FAB-MASSによりAの分子式はC₃₆H₃₇N₁₁O₈S₂、Bの分子式はC₄₂H₄₃N₁₃O₁₀S₂と決定した。赤外吸収スペクトルにおいてアミド(A、Bそれぞれ1690〜1640、1550〜1500cm^-1及び1695〜1645、1550〜1490 cm^-1)に由来する吸収が観測され、ペプチド化合物である事が推定された。そこで、アミノ酸分析を行った結果、両者ともに1モルのアラニン、グリシン、バリンを含んでいることが判明した。

　各種NMRスペクトルの解析によりpromothiocin Bは、デヒドロアラニン(Deala)3分子、チアゾール(Thz)2分子、オキサゾール(Oxa)2分子、ピリジン(Pyr)、バリン(Val)それぞれ1分子を含むことが判明した。なお、チアゾール及びオキサゾール環の構造は既知化合物のチアゾール、オキサゾール環との化学シフト値との比較により確認した。通常のHMBC実験によりThz(1)-Pyr-Deala(1)-Deala(2)-Deala(3)の結合は明かとなったがその以外の繋がりについての情報は得られなかった。そこで、4結合、5結合の水素-炭素遠距離スピン結合の観測が可能なD-HMBCの測定を行った。Delay timeを120 msec及び500 msecに設定しD-HMBCを測定した結果、Thz(1)、(2)の5位の水素からそれぞれのカルボニル炭素に水素-炭素遠距離スピン結合が観測され、さらにOxa(1)の5位のメチル水素からOxa(1)の2位の炭素及びカルボニル炭素に、Oxa(2)の5位のメチル水素からOxa(2)の2位及びPyrの2位、3位の炭素にそれぞれの水素-炭素遠距離スピン結合が観測され図の様に繋がりが判明しpromothiocinBの全構造が明かとなった。

　Promothiocin Aは¹H及び¹³CNMRスペクトルより、側鎖のDeala残基が1個である以外はBと同じ構造であることが判明した。

　Promothiocinの立体構造を明らかにするために、加水分解物(6N HCl、120℃、 20h)をchiral-HPLCおよびchiral-TLCにより分析した。その結果ValとAlaはL型であると決定した。しかし、2-(1-aminoethyl)thiazole-4-carboxylic acidは酸分解中にラセミ化されこの方法では立体を決定することは出来なかった。これについては現在検討中である。

　放線菌Streptomyces rochei DT31株が生産する活性物質thiotipinの精製は次のように行った。培養液30L分の菌体をアセトンで抽出後、酢酸エチル抽出、エーテル沈殿、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、シリカゲルTLC、高速液体クロマトグラフィーを行い、thiotipin 40mgを得た。Thiotipinは白色粉末で、高分解能FAB-MASSにより分子式をC₅₅H₅₀N₁₆O₁₇S₂と決定した。赤外吸収スペクトルにおいて、アミド由来の吸収が観測されペプチド化合物である事が推定された。各種NMRスペクトルの解析によりthiotipinはデヒドロアラニン(Deala)5分子、チアゾール(Thz)2分子、オキサゾール(Oxa)3分子、ピリジン(Pyr)、スレオニン(Thr)それぞれ1分子により構成されていることが判明した。さらにfield-gradient HMBC(FG-HMBC〉実験により以下の四つの部分構造が明かとなった;I)Thr-Thz(1)-Pyr-Deala(2)、(3)、(4)、(5)、II)Oxa(1)-Thz〈2)、III)Oxa(2)、IV)Deala(1)-Oxa(3)。さらに、D-HMBCを測定した結果、Oxa(1)の5位のメチル水素からOxa(1)の2位の炭素に水素-炭素遠距離スピン結合が観測されThrとOxa(1)の結合が判明し、また、Oxa(2)の5位のメチル水素からOXa(2)の2位の炭素に水素-炭素遠距離スピン結合が観測されThz(2)とOxa(2)の結合が明かとなった。また、Pyzの4位の水素からOxa(3)の4位の炭素に遠距離スピン結合が観測され、PyrとOxa(3)の結合が明らかになった。さらに、Oxa(2)のメチル水素とDeala(1)のアミド水素との間にNOEが観測され、thiotipinの全構造を図のように決定した。Thiotipinの立体構造を検討したところOxa(1)、Oxa(2)に存在するpropenyl側鎖はZ型で、ThrはL型であると決定した。

　Streptomyces lidicus DD84株が生産する活性物質geninthiocinの精製は次のように行った。培養菌体アセトン抽出物より、酢酸エチル抽出、Sephadex LH-20、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーなどにより白色粉末のgeninthiocinを得た。分子式は高分解能FAB-MASSによりC₅₀H₄₉N₁₅O₁₅Sと決定した。本化合物も赤外吸収スペクトルよりペプチド化合物である事が示唆された。各種NMRスペクトルの解析によりgeninthiocinはデヒドロアラニン(Deala)4分子、オキサゾール(Oxa)3分子、ピリジン(Pyr)、チアゾール(Thz)、スレオニン(Thr)、-ヒドロキシアラニン(Hyval)、それぞれ1分子により構成されていることが判明した。さらに、FG-HMBC及びD-HMBCを測定しその構造を図の様に決定した。

　放線菌Streptomyces morookaensis DP94株の培養菌体アセトン抽出物より活性物質を単離・精製した結果、thioxamycin(C₅₂H₄₈N₁₆O₁₅S₄)とその類縁体thioactin(C₄₃H₄₀N₁₄O₁₁S₄)を見出した。Thioxamycinは松本ら²⁾により単離された既知化合物であるがその構造解析方法及び化学シフト値の帰属等については知られていない。そこで、D-HMBCによりその構造を再検討し、さらに類縁体であるthioactinの構造を図に示すように決定した。

　Promothiocin生産菌であるStreptomyces sp.SF2741株の菌体アセトン抽出物からpromothiocin以外のプロモーター活性化物質を見出し、種々のクロマトグラフィーにより単離を行いpromoinducinと命名した。白色粉末で得られたpromoinducinの分子式は高分解能FAB-MASSによりC₅₇H₅₄N₁₆O₁₈S₂と決定した。各種NMRスペクトルの解析によりpromoinducinの構成単位としてデヒドロアラニン(Deala)5分子、チアゾール(Thz)2分子、オキサゾール(Oxa)3分子、ピリジン(Pyr)、スレオニン(Thr)それぞれ1分子の存在が判明した。さらにD-HMBC及びNOESYスペクトルの解析によりその構造を図のように決定した。

　TipAプロモーター活性化物質のスクリーニングによって得られた新規チオペプチド系化合物が活性を示す最低濃度を調べたところpromothiocinBが0.6ng/mlで最も強い活性を示し、geninthiocinは1.2ng/ml、promothiocin Aは20 ng/ml、thioactin、promoinducinは40ng/ml、thiotipin、thioxamycinは80 ng/mlであった。Promothiocin AとB、及びthioxamycinとthioactinはDeala側鎖以外は同一構造を有するが、その活性の強さは異なる。さらにチオペプチド系化合物ではあるが、Deala側鎖を有さないcyclothiazomycin、amythiamicin、GE2270 A等の化合物は活性そ示さないことより、Deala側鎖が活性に重要な役割を果していることが推測された。そこで、promothiocin Bをメタノリシスし、側鎖が消失したpromothiocin MO、MN(図)を得てその活性を測定した。その結果、MO、MN両者とも親化合物であるpromothiocin Bよりも約1/4,000(2.5g/ml)に活性が低下していた。このことよりDeala側鎖が活性に密接な関係があることが判明した。

　このスクリーニングにより得られた化合物は、既知化合物を含めてすべてがDeala側鎖(Micrococcinの場合はデヒドロブチリン)をもつチオペプチド系化合物であった。tipA蛋白質はチオストレプトンと結合することによりtipAプロモーターからの転写を促進することが明らかにされている³⁾。そこで、tipA遺伝子の保持とチオペプチド化合物の生産能との関係を検討した。チオペプチド生産菌10種及び非生産菌8種の染色体DNAを調製し、tipA遺伝子をプローブとしてサザンハイブリダイゼーションを行った。その結果、チオペプチド生産菌ではいずれの菌株においてもバンドが検出されなかったが、非生産菌においてはS.roseflavus、S.antibioticus、S.aureofasciculus及びS.citricolorでバンドが観察された。このことからtipA遺伝子はチオペプチド生産菌には存在せず、非生産菌にはかなりの頻度で存在する遺伝子であると推定されるが、その機能については不明である。