ALAの蛍光誘導体化反応の反応効率と回収率は、反応に用いる緩衝液のpH、濃度に大きく影響された。反応効率は、pH3.6(ALA-P)、pH3.4(ALA-B)で最高であったが、回収率はpH3.8で両者共ほぼ100%となり最良であった。pH3.8での緩衝液濃度を検討すると最終濃度25mM以上で良好な回収が得られた。また20l以上の上清を用いると反応効率が低下した。以上の検討から「対象と方法」に述べた測定法を確立した。ALA-P、ALA-B共に検量線は400g/lまで直線性を示し、検出限界は2g/l(S/N＝5)であった。ALA-P,ALA-Bの回収率はそれぞれ100.4±2.6%、102.0±4.1%(平均±標準偏差)であった。同時測定のCVはALA-Pで4.7%、1.8%(ALA-P濃度、10.5および60.5g/l)、ALA-Bで5.9%、1.7%(ALA-B、5.5および55.0g/l)であった。ALA-P、ALA-B共に抗凝固剤の違いによる測定値の差は認められなかった。

　鉛作業者72名のPb-Bは2.5-115.4(平均36.2)g/dl、ALA-Pは40.5±77.1(範囲6.5-441.5)g/l、ALA-Bは25.8±51.7(3.1-279.8)g/lであった。鉛作業者のALA-PとALA-Bの間には強い直線関係がみられた(r＝0.997)。各作業者について、ALA-P由来のALA-Bを意味する"ALA-B(P)"、すなわちALA-B(P)＝ALA-P(100-Hct)/100を求め、ALA-B(P)/ALA-Bを計算すると平均0.976±0.110となり、この比はPb-Bが上昇しても有意な変化を示さなかった。非曝露者26名のALA-Pは8.6±1.3g/l、ALA-Bは4.8±0.6g/l、ALA-B(P)/ALA-Bの平均は0.971±0.048であった。測定試料の安定性を調べた所、4℃ではALA-Pは3日間、ALA-Bは6日間有意な低下がみられなかった。-80℃では両者共に6か月間安定であった。

　鉛作業者においてALA-P、ALA-B、ALA-UCre、ALA-Dそれぞれの対数値はPb-Bと強い相関(いずれもrが0.9前後)を示した。しかしPb-Bレベルで鉛作業者を区切ったところ、40g/dl未満の鉛作業者群ではPb-BとlogALA-PおよびlogALA-Bとの相関(r＝0.811およびr＝0.798)はlogALA-UCreとPb-Bとの相関(r＝0.600)より有意に高く、logALA-Uでのそれは有意でなかった。さらに、15g/dl未満の群でも、logALA-P、logALA-B、logALA-DがなおPb-Bと有意に相関する一方、logALA-UCreとPb-Bとの間には有意な相関はなかった。また、15g/dl未満の群でALA-Dと有意な相関を示すものはALA-P、ALA-B、Pb-Bだけであった。鉛作業者全員での関係をみた場合、ALA-PおよびALA-Bは両者とも、ALA-UおよびALA-UCreとの間に強い相関(r>0.9)を示した。

　HPLCがALAの測定に導入される以前、ALA-P、ALA-Srは比色法により測定されていたが、その方法は多量の試料を必要とし、検出限界も非常に高いものであった。最近、Hosodaら、TakebayashiらはHPLC法による測定を試みているが、彼等の方法はALAのピーク分離が不完全で回収率が悪いため、標準添加法によらねば測定できない繁雑さがあった。本研究では、蛍光誘導体化反応条件を検討(酢酸緩衝液の導入、用いる除蛋白上清の減量など)し回収率をほぼ100%に改良したため、絶対検量線法による簡便な測定を可能にした。その結果、本法による非曝露者のALA-PおよびALA-Bは、Hosoda、Takebayashiらの値の約1/3となった。Tomokuniらは血漿または血清中ALAを除蛋白なしで直接蛍光誘導体化する方法を報告しているが、HPLCに注入する前に検体毎のfiltrationが必要であり、ALA-Bの測定もできない。Tomokuniらの非曝露者のALA-Pの値は本法による値とほぼ一致するが、彼等の値は回収率で補正すると高くなる。本法は少量の試料に適用可能なため、1回の採血でPb-B、ALA-P、ALA-Bの測定ができ、オートサンプラーを用いればルーチン化も可能である。

　これまで報告されているALA-Bの値は同一研究グループ(Hosodaら)においても一致せず、その値は他の研究グループによるALA-PのHct補正値とも一散しない。同一集団内でのALA-P、ALA-Bの測定なしには、血漿と血球中のALAの量的比較は困難である。また、血中でのALAの分布が鉛作業者と非曝露者で異なるかどうかも不明であった。本研究は鉛作業者および非曝露者の各人の血液について両者を平行して測定し、ALA-PからHct補正により計算されるALA-B(P)はALA-Bとほぼ一致し、血液中ALAはPb-Bによらずにほとんどが血漿中に存在することを明らかにした。ALA-BとALA-Pは計算により相互に変換可能である。ALA-Bの場合、溶血によりALA-Dが血球外に流出すると測定不能となるので、4℃保存ではALA-Pより安定性が劣る。-80℃保存では両者共6か月は安定である。ALAの血中分布および試料保存時の安定性に限ればルーチンの分析にはALA-Pの方が適していると考えられる。

　ALA-Dは鉛曝露に極めて鋭敏であり、その間値は10-20g/dlのPb-B範囲にあるとされてきた。しかしALA-Dには、40-50g/dl以上のPb-Bで活性の低下がプラトーに達すること、採血後の不安定性、測定法の繁雑さなどの問題があり、鉛曝露の生物学的モニタリングとしてルーチンに測定されるには至っていない。本研究ではALA-P、ALA-B、ALA-U、ALA-UCreおよびALA-Dの各指標を測定したが、ALA-PとALA-Bの間には他の指標との相関係数において有意差がみられなかった。Pb-Bとの相関において、全Pb-B範囲では、この両者はALA-UCreと同様の高い相関を示し、40g/dl未満のPb-B範囲ではALA-UCreより優れている。さらに、ALA-UCreでは(Tabuchiらと同様に)有意な増加がみられない15g/dl未満のPb-B範囲においてもALA-P、ALA-Bが有意に増加し、かつALA-Dとも有意に相関することは、両者のPb-Bに対する閾値がALA-UCreよりも低く、ALA-Dのそれに近いことを示している。以上より、ALA-PおよびALA-Bは低Pb-Bから高Pb-Bまで利用可能であり、鉛の非顕性影響の鋭敏な指標と考えられる。

　血中ALAと尿中ALAの比較を行った所、5mg/lのALA-Uは73.6g/lのALA-Pに相当すると計算された。この値はTomokuniらの報告より高いが、彼等の値はわずか16名での測定によるものであった。