酸化したLDL、老化赤血球、あるいはアセチル化等で化学修飾されたLDL(AcLDL)などの変性物質を認識し取り込む機構がマクロファージ系の細胞に存在することが知られている。これは生体内の老廃物、異物を除去する機構として重要と考えられている。一般に、生体成分の変性は陰性荷電の増加を伴い、これら変性物質の認識には多価の陰性荷電が関与することが示唆されている。変性物質を認識するレセプターは総じてスカベンジャーレセプターと言われている。スカベンジャーレセプターとしては最近Type I&IIスカベンジャーレセプター、CD36が同定されてきているが、これらですべての現象が説明できるかはいまだはっきりしていない。そこでまず私は、これら同定されたレセプターを発現させた細胞を用いることによって、そしてまた、他の人があまり用いないリガンドである酸性リン脂質を含む(多価の陰性電荷を持つ)リポソームの取り込みを指標にすることで、依然混沌としているマクロファージ上に存在するスカベンジャーレセプターについて簡単に整理することを試みた。

　さらに私は、非マクロファージ系の細胞であるCHO細胞をコレステロール供給がAcLDLのみとなる条件下で培養することにより、細胞上にAcLDLに対し高親和性のレセプターが誘導されることを明らかとした。また、リガンド特異性や阻害剤の感受性等の解析から、従来知られたタイプI&IIスカベンジャーレセプター、CD36とは明らかに異なる新規レセプターがこれらCHO細胞上に発現していることを明らかとした。

　最後に、様々な検討の結果、アフリカミドリザル腎臓由来の培養細胞株CV-1細胞(非マクロファージ系)が上記CHO分離株に発現した新規レセプターと非常に似た性質を有するレセプターを発現していることも見いだした。

　これらCHO分離株、CV-1細胞に発現した新規レセプターの特徴的な点は、他のスカベンジャーレセプターとは異なリアポトーシスを起こした細胞を取り込む能力も有することであり、生理的にも重要なレセプターである可能性が示唆された。以下ではこれらの点について簡潔にまとめたい。

　以上の検討により、まずマクロファージ上には従来知られたType I&IIスカベンジャーレセプター、CD36以外にも少なくとも1つの未知のスカベンジャーレセプターが存在することが示唆された。さらに、マクロファージ系以外の細胞でも、私が用いた条件下で分離されたCHO細胞、及び培養細胞株CV-1細胞上にはスカベンジャーレセプターが発現していることが明らかとなった。またこれらに発現するレセプターは、従来知られているマクロファージ上のType I&IIスカベンジャーレセプター、CD36、さらには想定された未知のレセプターYとはリガンドの特異性及び阻害剤の感受性の点で明らかに異なり、新規のスカベンジャーレセプターであることが強く示唆された(Table 1)。特に、今回私がCHO細胞上、CV-1細胞上に見出したレセプターは酸化変性物質とともにアポトーシスを起こした細胞も非常によく取り込むことから、生理的に重要なレセプターであると推察された。

Table 1Characteristics of scavenger receptors on CV-1 cells,CHO cells and macrophages

　本研究により、生体内には、複数のスカベンジャーレセプターが存在することが示唆され、これらが複雑に絡み合い、お互いに機能を補い合って働いていることが考えられた。今後の課題は、私が見いだした新規スカベンジャーレセプター分子の同定と、生体内における分布、発現の制御等の解析から、各スカベンジャーレセプターの役割、生理的意義を明らかにすることであろう。

　マクロファージ上に発現している事が知られるスカベンジャーレセプターI、II型とCD36を発現するCHO細胞株を樹立し、酸性リン脂質を含むリポソーム取りこみを検討した結果、CD36発現細胞でのみ取りこみが観察された。CD36発現細胞によるリポソームの取りこみはマクロファージの場合と異なりデキストラン硫酸では阻害されないことからマクロファージ上にI、II型、CD36以外のスカベンジャーレセプターの存在が示唆された。

　CHO細胞とLDLを除いた培地でアセチルLDL存在下培養し、シンバスタチンでコレステロール合成を抑制し、この条件下生き残る細胞をFACSを用いて濃縮、クローン化した。クローン化した細胞(CHO-AL1)は野性株と異なり、アセチル化LDLを取りこみ、酸性リン脂質含有リポソームも取りこんだ。両者の取りこみは相互に競合した。CD36はアセチルLDL取りこみには関与したいこと、などの事実も考えあわせると、発現しているレセプターはI、II型、CD36いずれとも異なる新規レセプターであると思われる。このレセプターを同定する目的でCHO-AL1株および野性株の表面糖鎖を³H標識し検討したところ、分子量88kのバンドが分離株、CHO-AL1にのみ観察された。このバンドの蛋白質が新規レセプターである可能性が考えられた。

　様々の培養細胞を検討した結果、CV-1細胞上に恒常的に発現していること、SV-40 LargeT抗原を発現させるとレセプター活性が顕著に抑制されることが判明した。

　IL-3依存性ラット肥満細胞株(MKM)をIL-3を除いた培地で培養するとアポトーシスが誘導される。この細胞を、CHO野性株、I型レセプターを発現したCHO株(CHO-SR7)、CHO-AL1株と培養したところ、CHO-AL1細胞のみがMKM細胞をとりこんだ。新規レセプターがアポトーシス細胞とりこみに関っている可能性が示された。

　以上、本研究は新しいスカベンジャーレセプターを各種細胞上に発見し、その機能を考察したもので、細胞生物学、病態生化学の発展に寄与するところがあり、博士(薬学)に価すると判定された。