ウリカーゼ抑制剤であるoxonate投与により血漿中尿酸レベルを高めた高尿酸モデルラットを用いて、定型クリアランス法によりE3040および抱合体の尿酸排泄促進作用を検討した。Fig.1にE3040および各抱合体投与後の、腎尿細管における尿酸排泄能を表す尿酸クリアランスをイヌリンクリアランスで除した値のfractional excretion of urate(FEurate)を示す。E3040 50mg/kg静注後15〜90分の間で、controlに較べて有意に高い値を示した。一方、E3040sulfate(E3040-Sul)と、E3040glucuronide(E3040-Glu)は100mg/kgの投与量において、いずれも一過性のFEurate上昇が見られたものの有意差は見られなかった。このことより、E3040が腎尿細管において尿酸排泄促進作用を有することがラットで示された。次に、E3040、E3040-Sulの静中時の血漿中動態を検討した結果、E3040 50mg/kg投与時のE3040-Sulの最高血漿中濃度は、E3040-Sul 20mg/kg投与後の血漿中濃度よりも低い値を示し、E3040静注後の腎臓中に、代謝物のE3040-SulがE3040よりも高濃度に見いだされた。しかし、E3040-Sul静注により、一過性のFEurateの増大傾向が見られたが、この投与量での腎臓中のE3040-Sul濃度はE3040投与後に見いだされるよりも約4倍の高い濃度を示した。これらの結果より、E3040投与後に観察された尿酸排泄促進作用は主にE3040の作用であると考えられた。

Fig.1 Time course of fractional excretion of urate (CLurate/CLinulin).Each point represents means±S.E.(n＝4-6);^**,p<0.01vs.control^*,p<0.05vs.control

　本研究では、DBA/2Nマウスを用いてE3040の尿酸排泄促進の機構を解析した。解析は、DBA/2NマウスにE3040、各抱合体、尿酸排泄薬投与後6時間にわたる尿中への尿酸排泄量を調べることにより検討した。Probenecidは尿細管において尿酸の再吸収と分泌の両方を抑制することにより逆説反応を示し、一方、再吸収のみを抑制するbenzbromaroneでは逆説反応を示さなかった。E3040投与後の、尿酸排泄速度は投与量依存的に上昇し、逆説反応は観察されなかった。このことから、E3040は尿細管での尿酸の再吸収を抑制するが、分泌抑制作用は有しないことが示された。また、各抱合体は、200mg/kgの投与量においても有意な尿酸排泄の上昇は観察されなかった。この結果は上記のFEurateの結果と一致した。次に、E3040が分泌前、分泌後のいずれの再吸収を抑制するのかを検討するために、pyrazinoic acid抑制試験を行った。pyrazinoic acidを前投与し、E3040投与による尿酸排泄量の回復を検討した結果、E3040は約30%程度にまで尿酸排泄を回復させた。これらの結果より、E3040は、分泌前の再吸収を抑制することにより尿酸排泄促進作用を示すことが明らかになった。

　抗ウイルス薬であるacyclovir(ACV)および葉酸代謝拮抗剤のmethotrexate(MTX)は、アニオン輸送系で輸送されることが示唆されており、また、腎排泄も分泌の寄与が大きいことが知られている。そこで、E3040とACVおよびMTXの相互作用をin vivo実験により検討した。E3040 50mg/kgi.v.投与後1分にACV(25mg/kg)、MTX(10mg/kg)静脈内投与した後の血漿中ACV、MTX濃度は、E3040非投与群に較べて高い値を示し、AUCはそれぞれ約2.3倍と1.6倍に増大した。また、腎クリアランスは両薬物共に、E3040非併用群に較べて有意に低下した(Fig.3,4)。このことから、E3040は、腎排泄の寄与が高いアニオン系薬物に対して動態学的相互作用を示す可能性が示唆された。

Fig.3 Plasma concentration-time profiles of acyciovir(ACV)with(●)or without(○)50mg/kg l.v.administration of E3040 after l.v.administration of ACV (25mg/kg)^**,p<0.01;^*,p<0.05(mean±S.D.;n＝3)

Fig.4 Renal clearance(0-120min)of acyclovir(ACV)after l.v.administration of ACV(25mg/kg)with E3040(50mg/kg).^**,p<0.01(mean±S.D.;n＝3)

　in vivoにおいて、アニオン系薬物とE3040との腎排泄における相互作用が示されたことから、本項では、E3040の尿細管におけるアニオン輸送系に対する作用を検討した。有機アニオン系薬物として、[³H]p-aminohippuric acid(PAH)を用い、腎刷子縁膜小胞取込みに対するE3040の作用を検討した。他の取込み阻害剤としてprobenecidとDIDSを用いた。[³H]PAHの腎刷子縁膜小胞への取込みに対し、E3040は、DIDSとほぼ同程度の阻害作用を有することが示された。次にカチオン輸送系に対するE3040の作用を検討した。カチオン系薬物として、〔¹⁴C〕tetraethylammonium(TEA)を用い、腎刷子縁膜小胞への取込み阻害作用を測定した。対照薬物として、HgCl₂、カチオン系薬物のcimetidineを用いた。cimetidineおよびHgCl₂は、腎刷子縁膜小胞へのTEA取込みの阻害作用を示したが、E3040では、100Mの濃度でもTEAの腎刷子縁膜小胞への取込み阻害作用を示さなかった。このことから、E3040は、カチオン系薬物の腎刷子縁膜小胞への取込み阻害作用を有しないことが示唆された。次に、刷子縁膜と同様に側底膜側にも発現しているアニオン、カチオン輸送系に対するE3040の効果を検討した。側底膜は、percoll密度勾配法により調整した。側底膜小胞への〔³H〕PAH取込みは、E3040により阻害されず、E3040-Sulは、DIDSに較べて弱い阻害作用を示した。一方、カチオン系薬物の〔¹⁴C〕TEAの取り込みに対して、E3040とE3040-Sulのいずれも阻害作用を示さなかった。

　以上のことから、E3040は、腎刷子縁膜側でのアニオン系薬物輸送阻害効果を有するが、側底膜側でのアニオン系薬物輸送阻害は、E3040-Sulのみが弱い阻害効果を示すことが示唆された。反対に、E3040およびE3040-Sulは、カチオン系薬物の輸送には、刷子縁膜側、側底膜側共に阻害効果を持たないことが考えられた。これらのことから、E3040は腎尿細管での排泄機構がアニオン系薬物輸送系が関与する薬物と、腎排泄機構において相互作用を示す可能性が考えられた。