主としてC57BL/6マウス(0〜4,8〜20,110〜114週齢)の胃・十二指腸から大腸までの消化管を検索した.さらに,無菌マウス,ヌードマウス,TCRミュータントマウス,SCIDマウス,RAG-2ミュータントマウス,alyマウス(リンパ節欠損マウス),W/W^vマウス(c-kitミュータントマウス),IL-7Rミュータントマウスの消化管についても検索を行った.

　上記種々のマウスの長軸方向に切開した腸管を約1cmの長さに切断し,O.C.T.コンパウンド中で急速凍結した.クリオスタットを用いて6mの厚さで新鮮凍結標本を作製し風乾した後,アセトンあるいはパラホルムアルデヒドで固定した.染色はヘマトキシリン・エオジン染色の他に各種モノクローナル抗体を用いた酵素抗体法や二重蛍光抗体法による免疫染色を行った.酵素抗体法では各種モノクローナル抗体(IgG;一次抗体)を反応させた後,一次抗体を作成した動物のIgGに対するビオチン化抗IgG抗体を反応させ,さらにアビジン・ビオチン・ぺルオキシダーゼ複合体を反応させてDAB(3,3’-Diaminobenzidine)発色を行った.その後核染色をヘマトキシリンにて行った.

　C57BL/6マウスに,BrdU(20mg/kg body weight)を腹腔内投与し(6時間ごとに5回),最終投与の1時間後に腸管を摘出して抗BrdUモノクローナル抗体を用い酵素抗体法でBrdU取り込み細胞を検索した.

　消化管でアポトーシスを起こした細胞が存在するか否かをMEBSTAIN apoptosis kit(MBL CO.,LTD)を用いてTUNEL法(terminal deoxynucleotidyl transferase[TdT]-mediated dUTP-biotin nick end labeling method)により検索した.

　C57BL/6マウス1匹あたりエストロジェンを1mg皮下投与し,2週間後に腸管の組織学的検索を行った.

　C57BL/6マウス(8〜20週齢)の腸管をヘマトキシリン・エオジン染色し詳細に検索したところ,小腸では絨毛基部から筋層にかけての粘膜固有層に平均すると直径100mほどのリンパ球様細胞の小集積が数多く存在することを見いだした.このような小集積は十二指腸・空腸・回腸のみならず大腸にも存在し,その数は概算でマウス腸管あたり1,500箇所にも及ぶ.これらのリンパ球様細胞小集積には濾胞形成が全くみられず,パイエル板や,孤立リンパ小節のように濾胞関連上皮でおおわれてもおらず,今までに報告されている腸管リンパ組織とは明らかに異なった組織学的特徴を示した.我々は腸管陰窩の間に存在する小リンパ組織という意味でこのリンパ組織をクリプトパッチ(cryptopatch:CP)と命名した.

　次に,CPを構成する細胞を主としてリンパ球細胞表面抗原に対するモノクローナル抗体を用いた免疫組織染色により検索した.その結果,CPの細胞の多くはCD3,TCR,TCR,鎖,鎖を発現しておらず,成熟リンパ球はほとんど存在しないことが明らかとなった.さらに興味深いことに,CP細胞の多くがc-kit,Thy1,IL-7R,LFA-1陽性であった.さらに,大多数の細胞がc-kit,Thy1,IL-7R及びLFA-1を同時に発見していることを二重蛍光抗体法で確認した.また,CPの細胞はPgp-1,HSA,IL-2R,Ly-1,CD4,CD8を様々な頻度で発現していることから,様々な発達段階にあるリンパ球前駆細胞であることが示唆された.さらに,CPには非リンパ球系の細胞が存在しており,それらはCD11c陽性の樹状細胞の形態を示していることが二重蛍光抗体法で確かめられた(CP構成細胞の20〜30%).

　CPの細胞の多くがリンパ球前駆細胞であるとすれば,発達分化の過程として盛んに分裂していると考えられる.さらにアポトーシスを起こしている細胞が存在する可能性もある.そこで,BrdU投与実験とTUNEL法によるアポトーシス細胞の検出を行った.BrdU投与実験の結果,CPに存在する細胞の約20%がBrdU陽性細胞であった.この割合は胸腺髄質とほぼ同程度の割合であり,胸腺皮質よりは少なく,パイエル板よりは多いことが分かった.アポトーシス細胞は陰窩上皮細胞のごく少数に検出可能であったがCPには検出できなかった.さらに,先に述べたように,CPの細胞の多くがリンパ球前駆細胞であるとすればRAG-1分子の発現を検索することが重要と考え,抗RAG-1モノクローナル抗体を用いた免疫組織染色を行った.その結果,胸腺に反しCPにはRAG-1分子陽性細胞は認められなかった.

　CPの組織形成を検討するために胎児期後半から生後,年齢を追ってマウス腸管の検索を行った.その結果生後1週目には粘膜固有層にCD11c陽性樹状細胞の小集積が出現し,生後14-17日になって初めて腸管にc-kit陽性細胞とCD11c陽性樹状細胞とが共存するCPが認められるようになった.また,胸腺が萎縮した超高齢マウス(110〜114週齢)にも若いマウスと同様にCPは存在し,エストロジェン投与マウスでは胸腺が著しく萎縮するにもかかわらずCPの数は約2倍に増加していた.

　無菌マウスではパイエル板などの末梢リンパ組織の発達は十分でなかったが,CPは通常飼育マウスと同程度の大きさ・数が存在した.

　ヌードマウス,TCRミュータントマウス,SCIDマウス,aly/alyマウス(リンパ節欠損マウス),RAG-1ミュータントマウス,W/W^vマウス(c-kitミュータントマウス)のいずれにおいてもCPは存在し,CP細胞はc-kitや各種リンパ球細胞表面分子の発現がC57BL/6マウスのそれに匹敵することが確かめられた.ただ唯一の例外としてW/W^vマウスCPの細胞は予想通りc-kitの発現がきわめて弱かった.また,IL-7RミュータントマウスではCPはほとんど認めなかった.