性フェロモン腺をn-ヘキサンに10分間浸漬して抽出される性フェロモン成分量から性フェロモン生合成活性を推定した。まず、羽化後1〜10日齢の処女雌について、暗期開始2時間後の主成分Z9-16:Aldの保有量を測定した。フェロモン生合成は1日齢において最大レベルにあり、それ以後は加齢にともなって減少した。つぎに、1日齢の処女雌を用いて15L:9Dにおける24時間の変化を調べたところ、性フェロモンの4成分(Z9-16:Ald,16:Ald,Z11-16:Ald,Z9-16:Ac)がほぼ暗期中に限って検出され、性フェロモン生合成が暗期におこることがわかった。アルデヒド3成分(Z9-16:Ald,16:Ald,Z11-16:Ald)の性フェロモン腺中の保有量の変化は互いに似たパターンを示し、暗期の中間(暗期開始から4〜8時間)に最大になった。一方、アセテート成分Z9-16:Acの保有量はアルデヒド成分とは異なり、暗期の末期に明瞭なピークが見られた。

　処女雌の頭胸間を結紮するか、または断頭をおこなうと、正常虫で性フェロモン生産がみられる暗期開始2時間後にもZ9-16:Aldが検出されなかった。つぎに、雌および雄の頭部抽出物、雌および雄の脳-食道下神経節複合体ホモジネート、合成PBAN(Helicoverpa zeaのPBAN;Hez-PBAN)を、断頭した処女雌の血体腔に注射したところ、いずれの注射によっても正常虫では性フェロモン生産がみられない明期にZ9-16:Aldが合成された。これらの結果は、脳または食道下神経節、あるいは両方で、雌雄を問わずPBANないしPBAN様因子が合成・蓄積されていることを示唆する。注射によって誘導される性フェロモンの量は、頭部抽出物でも脳-食道下神経節複合体のホモジネートでも雌雄間で同等であった。処女雌1頭当量の雌頭部抽出物を、断頭した処女雌の血体腔に注射して、フェロモン腺における性フェロモン生合成の経時変化を追跡した。注射15分後からZ9-16:Aldが検出され、45分後にはピークを迎えたが、2時間後にはごく微量しか検出されなかった。同様の結果は合成PBANを注射した場合にも得られた。これらから、PBANは、少なくとも暗期前半には継続して血液中に放出されてフェロモン生合成を促進していることがうかがえた。性フェロモン生合成量は、注射した頭部抽出物量、ないし合成PBAN量により変化した。最低1fMの合成PBANによってもZ9-16:Ald生産が誘導された。1〜10pMの合成PBANによって生産された量の間には有意差は見られなかった。これらの結果から、PBANまたはPBAN様因子の血液中の濃度は1〜10pMのレベルであることが示唆された。

　タバコガのPBAN(Has-PBAN)のcDNA(756塩基)を、タバコガ成虫の脳-食道下神経節複合体より単離して塩基配列を決定した。cDNA塩基配列より推定されたプレプロホルモン(194アミノ酸残基)がプロセッシングを受けて、PBAN(33アミノ酸残基)と4種のペプチド(それぞれ24アミノ酸残基、7アミノ酸残基、18アミノ酸残基、8アミノ酸残基)が生成すると予想された。Has-PBANおよび他の4種のアミノ酸配列は、近縁種H.zeaにおけるHez-PBANおよび4種のペプチドの配列とそれぞれ完全に一致した。また、これら5種の予想されるペプチドは、いずれも5アミノ酸残基(FXPRL)からなる共通のペプチド配列をC末端に持っていた。以上から、タバコガ雌成虫は自身の持つPBANを性フェロモン生合成に利用していると考えられる。1〜3日齢の雌および雄成虫の脳-食道下神経節複合体由来のmRNAをノーザンハイブリダイゼーションによって調べたところ、いずれにおいてもHas-PBAN cDNAに相当するサイズを持つmRNAバンドが1本だけ見られ、しかも、その発現量は雌雄で同じレベルであった。このことから雄の脳-食道下神経節複合体ホモジネート中にみられた性フェロモン生合成活性化因子はHas-PBANそのものであることが示唆される。しかし、雄におけるHas-PBAN、ならびに雌雄における他の4種のペプチドの生理機能は不明である。

　合成したカイコPBAN(Bom-PBAN I)をビオチン標識してHPLC分析した結果、二つのピークが得られた。これらビオチン化PBANと考えられるもののHPLC分析における保持時間はいずれもBom-PBAN Iよりも長かった。HPLC画分のウェスタンブロットを抗ビオチン抗体とハイブリダイズさせて、Bom-PBAN Iがビオチン化されていることを確認した。HPLC画分のTOF-MS分析からも、分子量の異なる二つのビオチン化PBANが得られたことがわかった。これら二つのビオチン化PBANのうち、分子内の2箇所でビオチン標識されたビオチン化PBANを用いて、PBANレセプターcDNAのスクリーニングを行うことにした。まず、ビオチン化PBANを断頭したカイコ処女雌成虫の血体腔に注射したところ、性フェロモン成分ボンビコールの生産が誘導された。また、ボンビコール生産量はビオチン化PBANの注射量に応じて変化した。したがって、Bom-PBAN Iのビオチン化はPBAN活性自体には影響を与えていないことが示された。羽化前後の雌の性フェロモン腺由来のmRNAからcDNAライブラリーを作成し、パニング法によってスクリーニングした。第一次スクリーニングで陽性クローンを含むと考えられる1.5×10⁴個のクローンを得て、第二次スクリーニングに供した。しかし、数回の試行にもかかわらず、第二次スクリーニングにおいて陽性クローン率を上げることができなかった。

　以上要するに、タバコガ処女雌成虫は中枢神経で生合成されたPBAN(Has-PBAN)を暗期になると継続的に血液中に放出して性フェロモン生合成を促進していることを示し、cDNAクローニングによって推定されたHas-PBANのアミノ酸配列は近縁種のH.zeaのPBAN(Hez-PBAN)のアミノ酸配列と全く同一であることを明らかにした。Has-PBANは性に関係なく合成されて頭部に蓄積されるが、雄における動態、機能は不明である。また、カイコにおいてビオチン化PBANがフェロモン生合成促進活性を有するとともに抗ビオチン抗体との免疫反応性を保有していることを明らかした。これによりPBANレセプターcDNAクローニングにおけるビオチン化PBANの有用性が示唆された。