目的:腎微小循環におけるAT_1a受容体の局在を明らかにする。

　対象と方法:用いたAT_1a受容体遺伝子欠損マウスのへテロ接合体では、野生型でAT_1a受容体が発現している部位に、ATla受容体と-galactosidaseを発現しているので、-galactosidaseの同定によりAT_1a受容体の局在を検討した。また、連続切片を用いて-平滑筋アクチンと平滑筋特異的ミオシンの免疫組織化学染色を行い、輸入と輸出細動脈を同定した。

　結果:AT_1a受容体(＝-galactosidase)は、輸入と輸出細動脈の両方の平滑筋細胞に発現していた。また、AT_1a受容体は糸球体及び糸球体外のメサンギウム細胞、JG細胞にも発現していた。

　考察及び結論:連続切片を用いることにより、AT_1a受容体が輸入細動脈と輸出細動脈の両方に、同等に強く発現していることが示された。

　目的:exo vivoにおけるAIIの輸入細動脈と輸出細動脈への作用を検討した。

　対象と方法:野生型、ヘテロ接合体、ホモ接合体のマウスで水腎症を作製し、左腎臓を露出し、顕微鏡で直接腎細動脈を観察できるようにした。腎を浸した加温漕に10^-14M〜10^-6MのAIIを投与した。また、10^-5Mの濃度でAT₁受容体拮抗薬のCV-11974(カンデサルタン)を予め野生型のマウスに投与し、その後、AIIを上記と同様に投与した。

　結果:野生型マウスでは、AIIに対して10¹⁴Mから10⁶Mまで用量依存性に、輸入・輸出細動脈は収縮した。予めCV-11974を投与した場合、10^-14Mから10^-10MのAIIに対する輸入及び輸出細動脈の反応は見られなくなった。ホモ接合体では、輸入細動脈と輸出細動脈は両方とも著明に拡張しており、AII10^-8Mでどちらの細動脈も全く変化しなかった。

　考察及び結論:AIIが両方の細動脈に同等に作用することが示され、研究1-1のAT_1a受容体の局在の結果と一致していた。また、AIIの細動脈への作用は、AT_1a受容体を介していることが示された。

　目的:AT_1a受容体遺伝子欠損マウスで低レニン性高血圧モデルであるDOCA食塩高血圧を作製し、糸球体障害の進展における組織レニン・アンジオテンシン系の関与を明らかにすることを目的とする。

　対象と方法:野生型、ヘテロ接合体、ホモ接合体マウスのDOCA食塩高血圧モデルを作製した(wild+DOCA群、hetero+DOCA群、homo+DOCA群)。2週間毎に血圧を測定し、6週間目に右腎臓を潅流固定し、糸球体障害について半定量的に検討した。

　結果:DOCA食塩高血圧群において血圧はwild+DOCAでは100から124mmHgと+23mmHg、hetero+DOCAでは98から125mmHg(+27mmHg)、homo+DOCAでは78から113mmHg(+35mmHg)と上昇した。また、糸球体障害も、wild+DOCA、hetero+DOCA、homo+DOCAの順に強かった。DOCA食塩高血圧群において血圧の上昇の程度(BP)と糸球体障害の程度には相関関係が認められた(r＝0.63)。

　考察:本研究では、ホモ接合体のDOCA食塩高血圧で最も血圧が上昇し、糸球体障害も強かったことから、本低レニン性高血圧における糸球体障害には、組織レニン・アンジオテンシン系は関与せず、血圧が関与していることが示唆された。また、AT₁を介するAIIの働きが欠損すると、食塩感受性が亢進することも示された。この機序としてAT_1a受容体遺伝子欠損マウスでは近位尿細管でのNa排泄がもともと増加している状態にあるが、そこにさらに塩分を過剰に負荷すると処理能力を越え、Naが体内に著明に貯留し血圧が上昇することが考えられた。また、AIIのAT_1a受容体を介する働きの欠落のため、Na負荷に対しさらに輸入細動脈が拡張することでNa利尿を達成することができないことが考えられた。

　結論:この研究では、レニン・アンジオテンシン系の欠損が高血圧における食塩感受性を惹起し、高血圧による糸球体障害がAIIのレベルにではなく血圧に依存していることが示された。

　目的:研究2-1で得られた結果をさらに確認するために、野生型マウスにACE阻害薬及びAT₁受容体拮抗薬を投与しDOCA食塩高血圧モデルを作製し、Ca拮抗薬または遮断薬を投与した場合と比較検討した。

　対象と方法:野生型マウスに、DOCAを留置する2週間前(-2週)からimidapril 25mg/Kg/day(DOCA+imidapril)、TCV-116 10mg/Kg/day(DOCA+TCV)、betaxorol 20mg/Kg/day(DOCA+BXL)、またはdiltiazem 100mg/Kg/day(DOCA+diltiazem)を投与した。薬剤を投与しない群をwild+DOCA群、対照群として左腎摘し1%食塩水を負荷したのをwild群とした。

　結果:血圧はwild+DOCAで109から126mmHgと+18mmHgの上昇、DOCA+imidaprilで84から128mmHgと+44mmHgの上昇、DOCA+TCVで82から124mmHgと+42mmHgの上昇、DOCA+BXLで88から116mmHgと+29mmHgの上昇、DOCA+diltiazemで85から114mmHgと+29mmHgの上昇と、BPはDOCA+imidaprilとDOCA+TCVでwild+DOCAに比較して有意に大きかった(p<0.01)。糸球体障害も、DOCA+imidaprilとDOCA+TCVで強い障害がみられた。また、DOCA食塩高血圧の中で、BPと糸球体硬化のスコアとの間には相関関係がみられた(r＝0.42、p<0.01)。

　考察:本研究では、野生型マウスのDOCA食塩高血圧モデルで、ACE阻害薬及びAT₁受容体拮抗薬を投与により、Ca拮抗薬または遮断薬を投与した場合よりも血圧は上昇し、高血圧による糸球体障害が増悪した。このことは、研究2-1で得られた、レニン・アンジオテンシン系の欠損が高血圧における食塩感受性を亢進させるという結果と一致している。低レニン性高血圧を呈するDOCA食塩高血圧モデルで、ACE阻害薬でも降圧作用がみられるとの報告はあるが、今回の実験のように予めACE阻害薬またはAT₁受容体拮抗薬を投与して、AT_1a受容体遺伝子欠損マウスと同様にAIIのレベルが変化しない状態におくと食塩負荷に対し対処できなくなると考えられた。

　結論:研究2-1の結果がさらに確認された。

　結語:今回の研究で、AIIがAT_1a受容体を介して、輸入細動脈と輸出細動脈の両方に同程度に作用し、糸球体血行動態を調節していることが示された。また、ルニン・アンジオテンシン系の欠損は食塩感受性を亢進させ、糸球体障害を悪化させることが示された。