患者の血漿サンプルを用い、主要なHIV-1構造蛋白であるgp120,とp24,逆転写酵素(RT)とアクセサリー遺伝子産物であるTat,Rev,Vif,Nef蛋白に対する抗体価をELISA法により測定し、抗体価を長期未発症者とAIDS発症者で比較した。するとAIDS発症者に比べ、アクセサリー遺伝子産物の1つであるNef蛋白に対して高い抗体価を保有する長期未発症者が5名(5/7)見られた。Nef蛋白に対する患者抗体についてより詳細に調べるため、206個のアミノ酸からなるNef蛋白全体をカバーするように、9残基のペプチドを3アミノ酸ずらしで66個合成した。これらを抗原としてELISA法で患者抗体を用いてエピトープマッピングを行った。その結果、Nef蛋白のN末端とC末端の中間あたりに相当する91番目から99番目のアミノ酸からなるペプチドに対して、長期未発症者がAIDS発症者に比べ有意に高い抗体価を持つことが分かった(p<0.01)。このエピトープ部位をさらに詳しく解析するため、この部位に相当するペプチドでウサギを免疫してポリクロナール抗体を作成した。このポリクロナール抗体を用いてHIV-1感染細胞の免疫蛍光染色を行ったところ、感染細胞の表面が染色された。上記のペプチド相当の部位が感染細胞表面に露出されていることは、さらに補体依存性細胞障害実験、抗体を用いた細胞表面ラベリングで確認した。様々な病期の189名のHIV-1感染者において、このエピトープ部位に対する抗体価と感染者の免疫状態の指標であるCD4リンパ球の数との間に正の相関性があることが分かった(r＝0.457,p<0.001)。

　Nef蛋白は、主に感染細胞中で細胞膜の内側に存在すると考えられてきた。私の行った解析は感染細胞表面にNef蛋白の一部が発現しており、その部位に対する抗体価が病態進行に関わっている可能性が示唆された。

　長期未発症者とAIDS発症者のPBMCからそれぞれDNAを抽出し、各々2組のプライマーを用いたnested PCR法でtat,rev,vpr,vpu,vif,nefのウイルスアクセサリー遺伝子を増幅し、pGEM-Tクローニングベクターに組み入れ、クローン化した遺伝子を数個ずつABI377シークエンサーにて解析した。また対照として構造遺伝子部分のp24について同様の解析を行った。さらにホモロジー解析、系統樹の作成を国立遺伝研究所のClustal W programにより行った。感染プロウイルスのアクセサリー遺伝子(nef,vpu,vpr,vif,tat,rev)をシークエンスし、解析したところ、対象とした7名の長期未発症者の全てに、いずれかのアクセサリー遺伝子に欠失やナンセンスコドンなど異常を持つ変異クローンが多数存在することが明らかになった。異常を伴うアクセサリー遺伝子の変異クローンの割合を長期未発症者全体で見るとnefでは30.6%(11/36)、vpuでは34.5%(10/29)、vprでは9.5%(4/42)、vifでは23.1%(9/39)、rev-2(exon2)では33.3%(10/30)という結果であった。一方AIDS発症者では変異クローンが存在したのはvifの1クローンのみで、これはシークエンスした全てのアクセサリー遺伝子クローン231個のわずか0.4%にすぎなかった。

　アクセサリー遺伝子の解析の結果、長期未発症者において感染プロウイルスのアクセサリー遺伝子に欠失やナンセンスコドンなど異常な変異クローンが多く存在することが明らかになった。これら変異クローンには準種性があり、変異ウイルスにも複製能があるものと推測される。このような変異ウイルスの存在は、長期未発症者の低いウイルス量と高い免疫能に関係している可能性があると考えられる。