MLL遺伝子再構成を有する10;11転座型白血病患者6例の検体を用いてRT-PCR法により、MLL-AF10およびMLL-ABI-1の検出を試みた。

　マウスの32Dcl3細胞株からcDNAライブラリーを作成して新たにAbi-1遺伝子を単離した。

　悪性腫瘍細胞株、腫瘍組織におけるAF10とABI-1遺伝子の発現をRT-PCR法により検討した。また細胞株に増殖・分化誘導を試みてABI-1の発現の変化を検討した。

　15症例の内訳は、AML10例、骨髄異形成症候群4例、非ホジキンリンパ腫1例で、治療関連2次性白血病が2例であった。FISH法、サザンブロット法、RT-PCR法によりNUP98遺伝子の関与を検討した。

　t(8;11)およびt(11;12)を有する患者検体を用いて、cDNAライブラリーのスクリーニング、3’RACE法、RT-PCR法により新たな転座相手遺伝子の単離を試みた。

　白血病細胞株におけるHOX遺伝子の発現を、MLLの再構成のある白血病細胞株とない白血病細胞株との間でRT-PCR法により比較検討した。

　MLL遺伝子再構成を有する10;11転座型白血病患者6例中5例からMLL-AF10を、1例からMLL-ABI-1を検出した。今回新たに見い出したMLL-ABI-1融合転写産物を有する症例は世界で第2例目の報告となり、1例目の結果が偶然のものではなく、ABI-1も10;11転座型白血病においてreccurentに転座を起こす重要な遺伝子であることを支持する結果となった。MLL-AF10融合転写産物が検出された5例はmixed lineage leukemiaの1例を除きすべて急性骨髄性白血病(AML)(M5)であった。4例が19ヶ月以内に死亡しており、生存中のl例も2度の再発を繰り返していて、予後不良であると考えられた。MLL-ABI-1融合転写産物が検出された1例は、MLL上の切断点がエクソン6と7の間に存在し、自験例の1例目の報告と異なっていた。1例目の症例および本症例とも、乳児期発症の単球系白血病であり、一般に予後不良といわれる10;11転座型白血病でありながら無病生存中であるという共通点があった。同じ10;11転座型白血病でもMLLの相手遺伝子により予後が異なる可能性が示唆され、治療を行う際も、RT-PCR法による両者の鑑別が必要と思われた。

　新たに単離したAbi-1遺伝子は以前に報告されていたものより、ヒトABI-1やABI-2遺伝子と相同性が高く、本来の遺伝子と考えられ、ABI-1の配列がマウスでも高度に保存されていることが明らかとなった。

　AF10では、細胞株や腫瘍検体の種類による発現の差は認められなかったが、ABI-1では、アイソフォームの発現パターンに相違が認められた。特に白血病由来の細胞株と固形腫瘍由来の細胞株で大きく異なっており、それぞれの組織で特有の機能を有する可能性が考えられた。細胞株に増殖・分化誘導を試みたが発現の変化は認められなかった。また、ABI-1がABLと結合することから、BCR-ABLが発現している白血病細胞株においてABI-1の発現が他の白血病細胞株と異なる可能性が予想されたが、両者の間に発現の違いは認められず、ABI-1とBCR-ABLとの直接的関係は見い出せなかった。しかし、蛋白レベルでの発現の消失が報告されており、今後作成した抗体を用いてウエスタンブロット法による検討を進める予定である。今回の実験の過程で今まで報告されていなかった新たな2つのアイソフォームを見い出した。ABI-1は癌抑制遺伝子としての機能が推測されているが、最近、Rasのシグナル伝達にも関与することが示されており、MLLとABI-1の融合によりABI-1の機能が抑制されること、および、これらのシグナル伝達経路に生じる変化が、腫瘍化に関与している可能性が推測される。

　FISHまたはサザンブロット解析により、15症例中9例にNUP98遺伝子のsplitを確認した。既にNUP98の関与が報告されているt(7;11)、inv(11)、t(2;11)、t(4;11)以外に、t(8;11)とt(11;12)が1例ずつ認められた。RT-PCR法によりinv(11)とt(2;11)からはそれぞれNUP98-DDX10およびNUP98-HOXD13融合遺伝子を検出したが、t(4;11)からは既知の融合遺伝子は検出されなかった。15症例の転帰については、検討できた14例のうち、12例が死亡した。寛解に入った10例のうち9例が再発しており、生存中の2例のうち1例も再発し、現在骨髄移植を施行されていた。このことから、11p15転座型白血病は予後不良と考えられた。

　t(8;11)およびt(11;12)を有する患者検体を用いて、新たな転座相手遺伝子の単離を試みた。NUP98遺伝子はホメオボックス遺伝子を相手遺伝子とすることが多く、12q13にHOXC遺伝子が存在することから、t(11;12)(p15:q13)におけるNUP98遺伝子の相手がHOXC遺伝子であることが強く示唆された。HOXC群遺伝子はごく一部しか配列が判明していないものが多いため、マウスの塩基配列を用いてdbESTを対象にBLASTsearchを行い、HOXC9、C10の配列の一部を決定し、さらにマウスの塩基配列をもとに作成したプライマーを用いたRT-PCRによりHOXC8の配列の一部を決定した。これらのデータをもとにRT-PCR法により相手遺伝子の単離を試みたがキメラ遺伝子は得られず、さらに配列の不明なHOXC12、C13について検討中である。

　NUP98遺伝子の転座相手として白血病に強く関与するHOX遺伝子は、一方でその発現がMLLにより制御されていることが明らかになった。そこで、HOX遺伝子の発現がMLLによりどのように制御されているかを調べる目的で、MLLの再構成のある白血病細胞株とない白血病細胞株との間の発現の差をRT-PCR法により比較検討した。その結果、リンパ性白血病の細胞株において、特に癌化との関与が知られているHOXB8の発現がMLLの再構成のあるすべての細胞株で有意に減弱していた。このことから11q23転座型白血病において、HOX遺伝子の発現の変化が重要な役割を果たしている可能性が考えられた。HOX遺伝子は造血細胞分化のマスター遺伝子であると考えられている。NUP98遺伝子、MLL遺伝子ともに、直接的、間接的にHOX遺伝子の発現を制御することで、HOX遺伝子の異常な発現を介して白血病の発症に関与している可能性が考えられる。