本研究は、膵ランゲルハンス氏島(以下ラ島)を膵より分離する際に、ラ島標識として応用が検討されているラ島染色薬diphenylthiocarbazone(dithizone、以下DTZ)のラ島に対する毒性を明かにするために、ラットモデルを用いて、グルコース刺激に対するラ島のインスリン分泌能、グルコース刺激試験後のラ島のインスリン含有量、蛍光生細胞染色法によるラ島のviability、ラ島内に残留するDTZ量を実験的に検討したものであり、下記の結果を得ている。 1.DTZで染色したラ島(DTZラ島)では、染色直後には、グルコース刺激に対するインスリン分泌能やviabilityは低下し、DTZのラ島への影響が示された。しかし、基礎インスリン分泌量、2相性のインスリン分泌パターン及びインスリン含有量は保たれており、その影響は限定的なものであることが示された。 2.対照とした、DTZの溶媒であるDMSO-Hank’s液で処理したラ島(DMSOラ島)では、培養24時間後のインスリン分泌能やviabilityが培養開始前に比べて低下しており、培養操作にもラ島への影響があることが示された。さらに、基礎インスリン分泌量は増加し、2相性のインスリン分泌パターンは消失し、インスリン含有量は低下していた。すなわち、培養操作によるラ島への影響はDTZの影響より大きいことが示された。 培養24時間後のDTZラ島でも、基礎インスリン分泌量は増加し、2相性のインスリン分泌パターンは消失し、刺激インスリン分泌量やインスリン含有量やviabilityも低下していた。しかし、培養24時間後のDMSOラ島との間に差は無く、DTZの影響は認められなかった。 3.培養96時間後には、DMSO、DTZいずれのラ島においても、刺激インスリン分泌量及び2相性のインスリン分泌パターンは回復し、viabilityも維持され、DTZや培養操作によるラ島への影響は一過性であることが示された。 4.残留DTZは染色直後には検出されたが、培養96時間後には測定限界以下であった。 以上、本論文はラ島のインスリン分泌能、インスリン含有量、viability、残留DTZの解析から、DTZがラ島に対し安全な染色薬であることを実験的に明かにした。本研究は、人ラ烏移植の成否を左右するラ島分離の過程で、新しいラ島純化法として開発が進められているcell soritng法において、DTZをラ島標識として応用する際に重要な貢献をなすと考えられ、学位の授与に値するものと考えられる。 | 
g/ml Hank’s)液をあらかじめ作成し、使用時にHank’s液で4倍に希釈して蛍光染色に用いた。グルコース刺激試験に供しなかったラ島を各群より5個採取し、蛍光顕微鏡下にラ島のviabilityを検討した。
細胞内での動態を考慮すると、DTZがラ島内に残留していると考えられる染色直後でのラ島への影響を看過している可能性が考えられる。臨床においては、ラ島移植はラ島を分離した直後に行われている。したがって、ラ島標識としてDTZの臨床応用を考慮するうえで、染色直後におけるラ島に対するDTZの影響の有無を明かにすることは重要であり、今後cell sorting法などの開発を進めるにあたり意義あることと考え本研究を計画した。