KW-3635は試験管内の血小板凝集のみならず体内においても血小板の凝集を抑制した。In vitroにおいて、KW-3635は各種血小板凝集惹起物質によるヒト多血小板血漿(PRP)の凝集を強力に抑制した。U-46619(stable TXA₂ analogue),collagen,epinephrineによって惹起された血小板凝集を10^-7-10^-6Mでほぼ完全に抑制し、その効力はKW-3635と同様の非プロスタノイド系TXRA BM13,505より強力であった。Ex vivoにおいてもモルモット血小板凝集を強力に抑制し、作用持続時間は7時間以上であった。In vivoにおいてモルモットにU-46619を静脈内投与すると血中で血小板が凝集し、凝集塊が冠動脈、脳の動脈につまって致死にいたる。U-46619の投与の前にKW-3635をあらかじめ投与しておくとモルモットの致死が抑制された。KW-3635の血小板凝集抑制作用には種差が認められ、ヒト、モルモットで強く、ラット、イヌではやや弱く、ウサギでは非常に弱かった。また、KW-3635はヒト、モルモット血小板のPGD₂,PGE₁,PGI₂による血小板凝集抑制作用に影響しなかった。

　KW-3635はモルモット摘出大動脈標本のU-46619誘発収縮反応に強力に拮抗し、そのpA₂値は7.74であった。しかし、10^-5Mまで血管標本のKCl,noradrenaline誘発収縮に影響しなかった。

　以上の結果より、KW-3635は血管、および血小板においてTXA₂受容体に特異的に作用していることが明らかとなった。

　KW-3635は種々の血栓モデルにおいて血栓の生成を抑制した。血栓生成抑制に要する用量と血小板凝集抑制に要する用量はほぼ一致し、KW-3635は血小板凝集抑制作用に基づいて血栓生成を抑制していることが示された。

　末梢動脈閉塞症は動脈に内皮障害がおこることが引き金となって発症すると考えられる。モルモットの大腿動脈に光増感反応によって内皮障害を惹起し、血栓生成に要する時間を測定して末梢動脈における血栓生成抑制作用を検討した。KW-3635は10mg/kgより血栓生成を抑制し、この用量はex vivo血小板凝集抑制に要する用量と同一であった。

　tPA(tiaaue-type Plasminogen Activator)などの血栓溶解剤による血栓溶解後に血小板の活性化によって血栓の再閉塞が起こることが知られている。この現象へのTXA₂の関与を検証するため、イヌ大腿動脈を用いたtPAによる血栓溶解モデルを作製した。イヌ大腿動脈に銅製のコイルを挿入して血栓を作製し、tPAで溶解させた。その後に、溶媒投与群では100%(9/9)に再閉塞が生じたが、KW-3635は1mg/kg+1mg/kg/h(i.v.)の用量において完全に再閉塞の発生を抑制した。本モデルにおいては実験中の任意の時点で血栓の重量を測定できるように従来のモデルを改良し、定量性に優れたデータを得ることができた。

　一過性脳虚血発作(TIA)は頸動脈に生じた血栓が塞栓となって脳の血管を一時的に閉塞することによって発症する可逆性の神経症状と定義される。TIAの実験モデル作製は非常に困難であり、臨床症状に類似したモデルは皆無であった。今回、発生のメカニズム、症状がおのおのTIAに類似した実験モデルを作製し、KW-3635の作用および血小板凝集抑制作用との相関を検討した。内皮障害を与えたイヌ頸動脈を狭窄すると狭窄部位に血小板を主体とした血栓が生成、流失を繰り返し、血流の周期的な増減現象(CFR:Cyclic Flow Reduction)が発生する。この現象はTIAの発生メカニズムを近似したものと考えられる。KW-3635はCFRの発生を1mg/kg(i.v.)より抑制し、この用量は血小板凝集抑制の用量と一致していた。本実験においてCFRの発生抑制と血小板凝集抑制を同時に測定した報告は従来にはほとんどなく、オリジナリティの高い報告である。また、麻酔したイヌの頸動脈より血小板凝集惹起物質アラキドン酸を注入すると血中で生じた血小板塊が脳の血管を一時的に閉塞して脳の血流を低下させるためその血管の灌流域の脳波の一時的な平坦化が観察される。この現象はTIAの症状を近似したものと考えられる。イヌを用いて脳波の一過性の平坦化を検出した報告は従来にはない。KW-3635は1mg/kg(i.v.)より脳波の平坦化の継続、大脳皮質局所血流量の低下を抑制した。

　KW-3635は血管に対する親和性が高く、薬物が血中から消失した後も血管壁にとどまり血管への作用は持続する可能性が考えられた。In vitroのモルモット摘出大動脈標本において、KW-3635またはBM13,505処置下によって収縮させ、洗浄1時間後もう一度による収縮を惹起させた。KW-3635を前処置した標本では収縮は回復せず、むしろ収縮の抑制が増強された。一方、BM13,505を前処置した標本では薬物処置前の値まで収縮は回復した。Ex vivoにおいても同様の現象が観察された。即ち、KW-3635またはBM13,505を経口投与一定時間後に血管を摘出し、U-46619による用量反応曲線を描いたところ、KW-3635を前投与した血管の用量反応曲線は右方にシフトしていた。以上の結果から、KW-3635は生体内においても血管に親和性が高く、血小板に対する薬物の作用が消失したあとにおいても血管への作用は持続する可能性が考えられた。

　KW-3635はTXA₂の作用を抑制することによって間接的に好中球の心筋への浸潤を抑制し、虚血再灌流に伴う心筋障害を軽減した。イヌ冠動脈を1.5h結紮し、その後4.5h再灌流すると循環血中へのクレアチンキナーゼ漏出を伴う心筋障害が観察され、梗塞部位への好中球の浸潤が認められた。KW-3635は全身の血行動態に影響することなく梗塞部位への好中球の浸潤を著明に抑制した。本実験においては薬物による好中球の浸潤抑制を初めて組織レベルで確認しており、虚血心筋保護作用を有する薬物の研究において意義の深いものであるといえる。

　アスピリンは、抗血小板薬として、あるいは血栓性疾患の二次予防薬として汎用されているが、特に高用量において血管壁内皮細胞からのPGI₂産生量を減少させ、血栓生成方向に作用することが知られている。KW-3635は内皮細胞が正常なモルモット胸部大動脈において血管壁からのPGI₂産生量を減ずることがなかったがアスピリンは血小板凝集を抑制しない低用量においても血管壁からのPGI₂産生量を減少させた。さらに、KW-3635はバルーンカテーテルで擦過して内皮細胞を障害した状態においても血管壁のPGI₂産生量に影響を与えなかった。以上の結果より、KW-3635はアスピリンのように血管壁のPGI₂産生量を減ずることがないため、PGI₂産生減少によって懸念される血栓傾向を引き起こすおそれの少ないことが示された。

　以上のようにKW-3635は特異的なTXRAであり、強力な血小板凝集抑制作用とそれに伴う血栓生成抑制作用を有することを示した。一般的に、TXA₂の作用を阻害することによって血小板凝集抑制を示す薬物-TXRA,TXSI-のうちTXRAの方が理論的に血小板凝集抑制作用は高いと考えられている。TX合成酵素の阻害によって蓄積するPGH₂にも血小板凝集作用があり、TXRAはPGH₂による血小板凝集にも拮抗すると考えられるからである。この点でKW-3635は他のTXRAと同様にTXSIより優れている。また、KW-3635は他の大多数のTXRAと異なり、構造的にプロスタノイドの誘導体ではない。プロスタノイドの誘導体は高濃度になると本来の作用とは逆にTXA₂受容体を活性化する作用を示すものが多いが、KW-3635はそのような作用を全く示さず、この点で他の大多数のTXRAより優れていると言える。KW-3635が実際に臨床の場で強力な血小板凝集抑制作用を示し、優れた抗血栓作用を示すか否かはこれからの問題であり、今後の研究課題である。