ニワトリ卵より得た胎児よりchicken embryo fibroblast (CEF)を得た。ウイルスベクターはplasmidのconcatemer(2g)をリン酸カルシウム法でCEFにtransfectionし、5〜6日後の培養上清をウイルスストックとした。focus assayによりウイルスのタイターを求めた。

　CEFを最初のウイルス感染後、4日後に次のウイルスへ感染させ、形態の変化を観察した。また、2重感染した細胞3000個をsoft agarに浮遊させて、2週間後に出現したコロニー数を計算した。

　ウイルス感染細胞より核抽出物を調整し、AP-1結合部位を³²Pでラベルしてprobeとした。又、必要に応じて、プローブを加える15分前に抗体を含む血清を加えてスーパーシフトを解析した。混合物は4℃で、5%の非変性アクリルアミドゲルで電気泳動した。

　AP-1サイトを3copy直列でもつレポータープラスミド5gを、ポリブレーンDMSO法でCEFへtransfectionし、cell lysateをCAT assayに使用した(41)

　感染細胞よりRNAをAGPC法で調整し、10gのtotalRNAを80%ホルムアミドの中でRNAprobeとhybridyzeさせた後RNase AとのRNase T1で消化した。RNaseの消化より保護されたBandを電気泳動で検出した。

　細胞を³⁵Sにてラベルして変性状態(2%SDS下煮沸)にて細胞成分を調整し免疫沈降をおこなった。細胞成分(80g)をSDS-10%ポリアクリルアミドゲルにて泳動しpolyvinylidine difluoride膜へtransferし、ECL Western blot system(Amersham)にて検出した。

　V-Src、V-yes、V-fps、c-H-ras、N末欠失した活性型rafのtransformationがsupFos,supJunによって抑制されたが、V-myc、及びV-rosのtransformationは全く抑制されなかった。

　V-src、c-H-ras、ND-rafでtransformした細胞では有意にAP-1CAT活性が上昇している。1の結果と合わせて、これらの癌遺伝子のtransformationの重要な共通ターゲットの1つがAP-1であることを示唆している。これに対してmycでtransformした細胞では全くAP-1活性は上がっていない。V-rosのtransformationはsupfos、supJunに抵抗性があるが、V-rosでtransformした細胞ではAP-1は上がっていた。

　V-src、c-H-ras、ND-rafでtransformした細胞で、AP-1をprobeとしたGel-shiftを行った所、DNA結合活性の上昇が認められた。また上昇したAP-1結合活性は抗fra-2、抗Jun抗体によってスーパーシフトした。

　V-src、c-H-ras、ND-rafでtransformした細胞では、fra-2とc-Junのm-RNAが増加していた。しかしJunDのm-RNA量に変化はみられなかった。c-fosは放射性活性の高いRNA probeで検出感度を上げたが、全く検出されなかった。

　v-src,v-fps,v-ros,v-yes,c-Ha-ras,ND-raf感染細胞にてJunのタンパク量の増大が観察された。Fosは検出できなかったが、Fra-2のタンパク量の増加とリン酸化の上昇がみられた。

　個体レベルでAP-1 を破壊することを目的にsupFosを導入したtransgenic mouseを作成した。マウスで安定した発現が期待されるRSVのLTR領域をプロモーターとして選んだがsupFosの発現量がきわめて低くsupFosの生物活性を確認できなかった。それにかわる手段としてウイルスベクターをchickenに感染させるという実験を行ったがsupFos,supJunを感染させて腫瘍抑制の生物活性を確認するのは困難であった。細胞増殖に不利な活性を個体レベルでみるにはレトロウイルスは感染効率が低すぎると判断した