GM-CSF遺伝子導入LLC(LLC/GM)細胞は、線照射により予め増殖能をなくした後、腫瘍ワクチンとしてマウスに皮内接種した場合、2週間後に接種した野生株LLC細胞の生着もしくは増殖を、コントロール群に比して有意に抑制した。また、この抗腫瘍ワクチン効果は親株に対して特異的なものであった。しかしLLC/GMを線照射せずマウスに接種した場合には、その造腫瘍性およびその増殖速度は野生株のものと同程度であった。

　B7-1遺伝子導入LLC(LLC/B7)細胞を未処理でマウスに皮内接種した場合、一過性に腫瘍が形成されたものの、最終的に約9割のマウスで腫瘍が拒絶された。抗CD4または抗CD8中和抗体で処理したマウスに、LLC/B7細胞を接種したところ、抗CD8抗体処理群では100%の腫瘍形成を認め、抗CD4抗体処理群ではコントロール群と同様に腫瘍は完全に拒絶された事から、B7-1発現によるin vivoでの腫瘍拒絶に関わるエフェクター細胞は、主にCD8⁺T細胞であると考えられた。一方、LLC/B7を拒絶したマウスにおいて、その接種の28日後に野生株LLC細胞を接種したところ、約9割のマウスに腫瘍が形成された。また、IFN-処理により、in vitroでMHC classlの発現を誘導したLLC/B7細胞を最初の接種に用いた場合も、免疫学的記憶は誘導されなかった。以上より、この腫瘍モデル系において、B7-1遺伝子導入およびその発現は、造腫瘍能の低下には寄与するが、免疫学的記憶誘導には充分寄与できていないものと考えられた。

　GM-CSFとB7-1の両遺伝子を導入したLLC(LLC/GM+B7)細胞をマウスに接種した場合、造腫瘍性はLLC/B7と同程度に抑制された。一方、LLC/GM+B7あるいはLLC/B7の生着を拒絶したマウスに野生株LLC細胞を移植したところ、前者マウス群の拒絶率が後者マウス群のものより有意に高かった(55.6%vs11.8%;p＝0.0283)。また、in vitro CTLアッセイからは、LLC/GM+B7免疫マウス脾臓由来T細胞は、LLC/B7免疫マウス脾臓由来T細胞に比べ、親株に対するキラー活性が約3倍高かった。

　IL-12遺伝子導入LLC(LLC/IL12)細胞をマウスに接種した場合には一過性に腫瘍が形成されたが、最終的に90-100%のマウスで腫瘍生着は拒絶され、この拒絶率はIL-12産生量に依存した。LLC/IL12を拒絶したマウスに対して、移植後28日目に、野生株LLC細胞を接種したところ、約90%のマウスで腫瘍生着が拒絶された。In vivoにおけるLLC/IL12の腫瘍形成は、CD4⁺TとCD8⁺T細胞の両者を同時に除去した場合にのみ認められ、CD4⁺またはCD8⁺T細胞単独の除去では、いずれの場合も腫瘍は拒絶された。NK細胞除去群では腫瘍の拒絶までの期間がコントロール群より延長しており、早期の抗腫瘍免疫応答に関与していると考えられた。また、LLC/IL12で免疫したマウス脾臓由来のT細胞を用いたCTLアッセイでは、野生株LLC細胞と同系マウス由来のEL-4リンパ腫細胞の両方をターゲットとするキラー活性が観察された。ところがcold target inhibition testの結果から、このキラー活性は野性株に特異的なキラー活性および野性株とEL-4細胞の両者をターゲットにした非特異的なキラー活性の2種類から成立していることが判明した。一方既にLLC腫瘍を有するマウスに、LLC/IL12細胞を治療用ワクチンとして接種した場合、コントロールワクチンと比較して有意な腫瘍の増殖抑制を認め、一部では腫瘍が完全に消失したマウスも認められた。

　IL-12とB7-1あるいはIL-12とGM-CSFの2種類の遺伝子を導入・発現させたLLC(それぞれLLC/IL12+B7,LLC/IL12+GM)を樹立し、前述の治療用ワクチンの効果をLLC/IL12,LLC/B7ならびにLLC/GM接種群間で比較検討した。これらのうち、最も治療効果が優れていたのはLLC/IL12であり、LLC/B7やLLC/GM接種群の治療効果はコントロール群と比較して全く認められなかった。また、IL-12とB7あるいはIL-12とGM-CSFの同時発現細胞は、IL-12単独発現細胞より治療効果が劣る傾向にあった。