8週齢のC3H/HeNCrj雄マウスに、¹³⁷Cs線を全身照射した。染色体標本の観察は、核型分析と染色体ペインティングにより行った。3.0Gyを照射した5匹のマウスおよび非照射の5匹のマウスを、核型分析用のマウスとした。染色体ペインティング用マウスとして、1.0Gyおよび2.0Gy照射マウスをそれぞれ10匹ずつ、3.0Gy照射マウスを15匹用いた。

　照射終了24時間後にマウスを屠殺して、両側の大腿骨から骨髄を摘出した。採取した骨髄細胞には培養操作や人工的な増殖刺激を加えることなく、そのままの状態で染色体標本を作成した。

　核型分析に際しては、コントラストのよいQ-分染像を作成するために、DAPI(4’,6-diamidino-2-phenylindol)とアクチノマイシンDによる二重染色法を用いた。マウス1匹あたり50の二倍性細胞を核型分析した。

　染色体ペインティングには、マウスの2番染色体に特異的なビオチン化プローブを用いた。二倍性細胞を観察対象とし、染色体型の異常をPAINT方式に基づいて分類・記録したが、同分類方式では対象外となっている欠失についても記録した。

　8週齢のC3H/HeNCrj雄マウス51匹に、¹³⁷Cs線3Gyを全身照射し、AML誘発率を高めるために、照射終了直後に酢酸プレドニゾロン1mgを皮下注射した。10匹については、これらの処理に加えて、照射14日後から2週間に渡って、Recombinant Murine M-CSFを約500U/日ずつ腹腔内投与した。以上の処理を行ったマウスを、コンベンショナルな条件で終生飼育した。

　放射線照射等の処置をしたマウスの全身状態を、毎日定期的に観察した。顕著な衰弱が認められた場合に屠殺・解剖し、肉眼的な病理観察を行うとともに、AMLの発症の有無を病理組織学的診断によって判定した。

　AMLを発症したマウスについて、パラフィン包埋した脾臓の細胞に対して間期核FISHを行うことにより、2番染色体の異常について調べた。プローブとしては、マウス2番染色体のC領域にマップされる2種類のBACクローンを、ビオチン標識して使用した。

　3Gy照射群では、合計250の細胞のうち101個に構造的異常が認められた。101の異常細胞中には合計238の染色体切断点が同定され、そのうち16が2番染色体由来であった。非照射群では、同数の観察細胞中に3個の異常細胞が認められたが、2番染色体の異常は認められなかった。²検定の結果、照射群の5匹について、2番染色体切断の相対頻度に個体差が認められ(p＝0.045)、マウスEが有意差に寄与していることがわかった(Table 1)。したがって、マウスEにおける2番染色体の異常頻度が、有意に高かった。

　2番染色体には様々な種類の異常が生じていたが、マウスEに関しては10例中7例が欠失であり、そのうち3例が中間部欠失であった。また、AMLに特異的な2番染色体と同型の異常(以下、マーカー染色体と呼ぶ)は、観察細胞中マウスA〜Dでは1%、マウスEでは6%の細胞に認められた。

　ペイントされた染色体の異常の頻度を、(1)異常細胞の頻度、(2)欠失の頻度、(3)カラー接合部の頻度(交換型異常の指標)の三つの指標を用いて定量化した。これら三つの指標に対する線量-反応関係をFig.1に示す。切片を0として、二項回帰によるフィッティングを試みた結果、何れの指標についても、線量-反応関係はすべて二次曲線型となった。

　染色体ペインティングにおいても、異常頻度に個体差が認められ、異常細胞の頻度と欠失の頻度に関して、各線量群に1匹ずつ、合計3匹に有意に高い値が検出された。しかし、カラー接合部の頻度については、個体差が検出されなかったことから、この3匹は、2番染色体の異常の中でも欠失に対する感受性が高いことが示された。