CPとNCPウイルス相互の関連を知るため、CP BVDウイルスストックからNCPウイルスの検出と分離を試みるとともに分離ウイルスの性状について調べた。CP BVDウイルスストック中から干渉現象を利用したリバースプラック法によりNCP BVDウイルスを分離し、分離ウイルスのEND現象の発現、ウイルス干渉能及び抗原性について検討した。

　用いた4株全てのCP BVDウイルスストックからリバースプラック法によりNCP BVDウイルスが検出された。分離されたNCP BVDウイルスには、END現象陽性と陰性の2種類の性状の異なるものが同時に含まれていることが明らかとなった。END現象陽性NCP BVDウイルスは、CP BVDウイルスを干渉したが、END現象陰性のウイルスはCP BVDウイルスのみならず水胞性口炎ウイルスも干渉することが明らかとなった。CP BVDウイルス間の抗原性に差異が認められたが、CP BVDウイルスとそれから分離されたNCP BVDウイルスとでは抗原性の区別はできなかった。これらの現象から、分離されたNCPウイルスの起源については不明であるが、CPウイルスからNCPウイルスへの変異の可能性が示唆された。

　CP BVDウイルスストック中に性状の異なる2種類のNCPウイルスが混在していることが判明し、CPウイルスからNCPウイルスへの変異の可能性が示唆された。そこで、これらNCPウイルスの起源を知るために、CPウイルスであるNose株及びNADL株を限界希釈法及びプラック法によりクローニングを行い、各ステップ毎のサンプルについてNCPウイルスの検出を試みたところ、CPウイルスの増殖の過程で微量のNCPウイルスが産生されることが明らかになった。

　更に、BVDウイルスのCPウイルスからNCPウイルスへの変異機構の解明を目的とし、CPウイルスの宿主細胞由来mRNAのインテグレーションに注目し、CPウイルスであるNADL株及びOsloss株と真に親子関係にある2種類のNCPウイルスのペアーウイルスを用い、ウイルスRNAの非構造蛋白(P125)認識領域における宿主細胞由来mRNAのBVDウイルスRNAへのインテグレーションの動向について検討した。純化NADL株から分離されたNCPウイルスNADLE⁺及びNADLE^-株の塩基配列には、NADL株にある宿主細胞由来mRNA(270bp)がそのまま完全に欠損していた。また、純化Osloss株と分離したNCPウイルスのペアーでは、Osloss株に認められた宿主細胞由来mRNA(228bp)が、NCPウイルスOslossE⁺及びOslossE^-ではそのまま完全に欠損していた。これら遺伝子解析の結果、親株のCPウイルスにインテグレートされている宿主細胞由来mRNAが、NCPウイルスには欠損していることが明らかとなった。以上の結果からCPウイルスにインテグレートされている異種RNAの脱落によってCPバイオタイプからNCPバイオタイプに復帰変異することが証明された。

　著者らが分離したNCP BVDウイルスとオルビウイルスとの培養細胞における相互作用を知る目的で、NCP BVDウイルスを感染させた牛精巣培養(BT)細胞にオルビウイルスを重感染させCPEの発現及び増殖性について検討した。NCP BVDウイルス感染BT細胞に7種類のオルビウイルスを重感染させたところ、全てのウイルスがCPEを発現するとともにBVDウイルス非感染BT細胞に比べウイルスの増殖が100倍以上増強された。一方、NCP BVDウイルス10株のうちEND現象陽性の7株を感染させたBT細胞では、イバラキウイルスの増殖が増強され、CPEが発現した。対照的に、END現象陰性の3株ではイバラキウイルスの増殖は抑制されるとともに、CPEも観察されなかった。更に、END現象陽性BVDウイルスを感染させたBT細胞では、BVDウイルス非感染BT細胞に比べイバラキウイルスによるインターフェロンの産生が抑制されていた。以上のことから、END現象陽性NCP BVDウイルスはBT細胞においてオルビウイルスの増殖を増強することが明らかとなり、この増殖増強作用は、重感染ウイルスによるインターフェロンの産生をBVDウイルスが抑制することによることが示唆された。

　以上、本研究は、BVDウイルスのバイオタイプと外来RNAのウイルスRNAへのインテグレーションの動向との関連について解析を行い、提唱されている仮説を逆説的に証明した。今回得られた情報は、BVDウイルスの変異について解析を行うための有用なデータになるものと思われる。

　CPとNCPウイルス相互の関連を知るため、CP BVDウイルスストックからNCP BVDウイルスを分離し、その性状について検討した。用いた4株全てのCP BVDウイルスストックからNCP BVDウイルスが検出された。分離されたNCP BVDウイルスには、END現象陽性と陰性の2種類の性状の異なるものが同時に含まれていた。END現象陽性ウイルスは、CP BVDウイルスを干渉(同種干渉)したが、END現象陰性ウイルスはCP BVDウイルスのみならず水胞性口炎ウイルスも干渉(異種干渉)することが明らかとなった。CP BVDウイルス間の抗原性に差異が認められたが、CP BVDウイルスとそれから分離されたNCP BVDウイルスとでは抗原性の区別はできなかった。

　これらの現象から、分離されたNCPウイルスの起源については不明であるが、CPウイルスからNCPウイルスへの変異の可能性が示唆された。

　CP BVDウイルスストックから分離されたNCPウイルスの起源を知るために、CPウイルスであるNose株及びNADL株のクローニングを行い、各ステップ毎にNCPウイルスの検出を試みたところ、純化CPウイルスの増殖の過程で微量のNCPウイルスが産生されることが明らかになった。

　更に、BVDウイルスのCPウイルスからNCPウイルスへの変異機構の解明を目的とし、CPウイルスの宿主細胞由来mRNAのインテグレーションに注目し、CPウイルスであるNADL株及びOsloss株と真に親子関係にある2種類のNCPウイルスのペアーウイルスを用い、ウイルスRNAの非構造蛋白(P125)認識領域における宿主細胞由来mRNAのBVDウイルスRNAへのインテグレーションの動向について検討した。遺伝子解析の結果、親株のCPウイルスにインテグレートされている宿主細胞由来mRNAが、NCPウイルスには欠損していることが明らかとなった。以上の結果からCPウイルスにインテグレートされている異種RNAの脱落によってCPバイオタイプからNCPバイオタイプに復帰変異することが証明された。

　著者らが分離したNCP BVDウイルスとオルビウイルスとの培養細胞における相互作用を知る目的で、NCP BVDウイルスを感染させた牛精巣培養(BT)細胞にオルビウイルスを重感染させCPEの発現及び増殖性について検討した。NCP BVDウイルス感染BT細胞に7種類のオルビウイルスを重感染させたところ、全てのウイルスがCPEを発現するとともにBVDウイルス非感染BT細胞に比べウイルスの増殖が100倍以上増強された。一方、NCP BVDウイルス10株のうちEND現象陽性の7株を感染させたBT細胞では、イバラキウイルスの増殖が増強され、CPEが発現した。対照的に、END現象陰性の3株ではイバラキウイルスの増殖は抑制されるとともに、CPEも観察されなかった。更に、END現象陽性BVDウイルスを感染させたBT細胞では、BVDウイルス非感染BT細胞に比べイバラキウイルスによるインターフェロンの産生が抑制されていた。以上のことから、END現象陽性NCP BVDウイルスはBT細胞においてオルビウイルスの増殖を増強することが明らかとなり、この増殖増強作用は、重感染ウイルスによるインターフェロンの産生をBVDウイルスが抑制することによることが示唆された。

　以上、本論文は、BVDウイルスのバイオタイプと外来RNAのウイルスRNAへのインテグレーションの動向との関連について解析を行い、提唱されている仮説を逆説的に証明したもので、学術上、応用上貢献するところが少なくない。よって審査委員一同は、本論文が博士(獣医学)論文として価値あるものと認めた。