1990年から1995年までの6年間に長野赤十字病院産婦人科を訪れた患者のうち腟壁に病変があり組織学的にVAINと同定できた71例を研究対象とした。これらの症例を臨床的な背景と病変の存在部位によりA、B、C群の3群に分類した。また病変の局在、年齢分布、コルポスコープ所見などの臨床像について検討した。VAIN例は患者の同意を得てなるべく経過観察を行った。観察は3月から6月ごととし方法は細胞診とコルポスコープ診を中心に診断し、もしコルポスコープで異常所見(白色上皮、赤点斑、モザイク)が認められたら生検を採取することを原則とした。病変の変化は消退、存続、進行に分類した。

　VAIN病変部からは5%酢酸加工によるコルポスコープ下狙い生検により組織検体を採取し直ちに2分割し、一方は免疫染色を含む組織検体としてホルマリン固定を行い、他はHPVDNA検索検体として実験まで-80℃に凍結保存した。組織診断は通常のヘマトキシリンエオジン染色で行い軽度異形成はVAIN I、中等度異形成はVAIN II、高度異形成および上皮内癌はVAIN IIIに分類した。koilocytosisが著明で基底細胞層の異型や増殖が軽度のものはVAIN Iに含めた。HPV抗原の検出は抗HPVモノクローナル抗体を用いたABC法による免疫染色により行った。

　VAIN病変部からのHPVDNAの検出は松倉・菅生が開発し1995年に報告したPBM-58法により組織から抽出したDNAを検体として行った。同法は緩やかな条件下でのサザンブロット法でプローブはHPV58型を用い、HPV型の判定は3種類の制限酵素(PstI,BanI,MspI)のそれぞれの切断パターンの多形性を利用して行った。また検体DNAのなかに既知のHPV型のいずれにも該当しないパターンを示す約8kilobase(kb)長のDNAは未同定HPVとした。新たなHPV型か否かは国際HPV分類委員会(Heiderberg,Germany)に照会した。

　71例のVAIN症例の年齢は17才から69才まで平均43才であった。A群は子宮全摘術既往例で15例、B群はCIN合併例(12例)、C群はVAIN単独存在(de novo例,44例)でC群が最も多かった。群間の年齢分布ではA・B間にのみ有意差がありB群が若かった。病変は腟上部1/3に全例存在しmultifocalな傾向が強かった。コルポスコープ所見では白色上皮(扁平型34例;48%、微小乳頭型26例;37%)と赤点斑所見(11例;15%)が主体でモザイクは認められなかった。組織診断ではVAIN Iが53例(74%)、VAIN II15例(21%)、VAIN III3例(4%)とVAIN I例が最も多かった。免疫染色では59例(83%)がkoilocytosisを示す上皮上層細胞の核に陽性所見が認められた。71例中56例が1年以上6年まで(平均3.8年)経過観察できた。そのうち43例(77%)は病変が消退し、13例(23%)が観察期間内で病変が存続した。進行例は1例もなかた。

　HPVDNA解析では71例全ての病変部からPBM-58法で単一のHPVDNAが検出された。同定されたHPV型は既知の15型(HPV16、18、30、31、35、40、42、43、51、52、53、54、56、58、66型)のほかに未同定のHPVDNAが少なくとも7種類以上存在するものと思われた。それらDNAのsingle cut enzymeを探し各酵素に対応するplasmid vector内にクローニングした。それらをHPV国際分類委員会に照会したところ、いずれも既知のHPVとは異なる新しいHPV型と認定され、それぞれHPV59、61、62、64、67、69 71型と命名された。A群の子宮頚部浸潤癌既往例の3例と、CIN合併6例について子宮頚部病変とVAINとのHPV型の比較が可能であった。A群では3例とも型が異なり、一方、B群では5例が同一であった。また病変持続例10例のうち5例で初回と2回目のHPV型が異なっていた。

　本研究では71症例という現在までの報告のなかで最も多数例について臨床的およびウイルス学的解析を行った。従来VAIN患者は高齢者に多いとされていたが本研究対象者の平均年齢は43才であり10代から60才代まで幅広く分布し若年層にも少なくないことを見出した。またCINや頚癌合併例が多いといわれていたが本研究では腟病変単独例(C群)が最も多かった。コルポスコープ所見では微小乳頭型白色上皮が扁平型白色上皮に次いで多い所見であること、multifocalな傾向にあることなどを明らかにした。組織学的には異型の軽い病変が多数を占めること、免疫染色により83%の病変でHPV抗原が陽性になりHPVにとってはproductive infectionの場になっているものと推定され腟管もHPVの性行為感染の重要なreservoirとなっていることが示唆された。一方、患者の追跡調査結果からはVAINが消退傾向の強い疾患であることがうかがわれた。そのために臨床的には直ちに治療するよりはしばらく経過を追うことが重要であると思われた。

　HPVDNAの検出結果では合計22種類ものHPV型が全ての病変から検出されVAINは多様なHPV型の感染により発生する上皮内病変であると考えられた。その上、本研究により7種類もの新たなHPV型を発見することができた。現在まで腟病変から新しいHPVを見出したとの報告は本研究のみで、このことからも腟壁が臨床上の盲点になっていることが推測された。頚癌に続発したVAIN症例やVAINの経過観察例で頚癌とVAIN,または追跡の前後で異なるHPV型が検出される例のあることが明らかになった。これらは今までは再燃や存続と考えられていたが実際には別のHPVによって病変が発生したことになる。HPV関連疾患では病変内に存在するHPV型の同定がいずれ重要な臨床的意義をもつようになるものと思われた。

　本研究により次の結果をえた。

　1)71例の腟上皮内腫瘍(VAIN)をA群(子宮全摘既往例)15例、B群(CIN合併例)12例、C群(de novo例)44例の3群に分類した。

　2)病変の数は平均2.5個でmultifocalな傾向があった。また全ての症例で腟上部1/3に病変が存在し13例(18%)で腟壁中1/3まで病変がおよんでいた。

　3)コルポスコープ所見は34例(48%)が扁平型白色上皮、26例(37%)が微小乳頭型白色上皮、11例(15%)が赤点斑であった。

　4)組織分類ではVAIN I53例(75%)、VAIN II15例(21%)、VAIN III3例(4%)でVAIN I例が多数を占めた。

　5)59例(83%)の症例でHPV抗原が陽性であった。

　6)経過観察56例中例43例(77%)は病変が消退し、残りの13例(23%)は存続し、進行例はなかった。

　7)71例全ての病変から単一のHPVが検出された。HPV型の種類は22種類同定された。

　8)本研究で新たなHPV型を7種類(HPV59、61、62、64、67、69、71型)発見した。

　9)腟壁には多くの種類のHPVが感染し、性器型HPVのreservoirの場と考えられた。