本研究は、体重2.5〜3.5kgの雌雄の家兎(日本白兎)計55羽を使用した。肺の灌流は、3%牛アルブミン含有クレブス液を使用し、50ml/minの定常流再灌流方式とした(図1)。換気設定は、V_T10ml/kg,RR5/min,Ppeak10〜12cmH₂O,PEEP2.5cmH₂Oで行い、95%空気と5%CO₂の混合ガスで換気した。気道内圧(Paw)、肺動脈圧(Ppa)、左房圧(Pla)を常時測定し、また、double vascular occlusion法を使用して肺毛細血管圧(Pc)を測定した。データは、MacLab(ADinstruments社)を用いて解析を行った。左房圧(Pla)は常時4mmHgとなるように設定し、灌流肺をWestのzone IIIの状態(Ppa>Pla>Paw)に維持した。インドメタシン(30M)をAChの肺血管収縮作用を消失するために灌流液に添加した。

図1

　全9羽の兎を50ml/minの灌流流量でPaw、Ppa、Pla、Pcのベースラインの圧測定を行った。次にトロンポキサンA₂類似薬U-46619持続投与による安定した肺高血圧の状態(Ppa:25〜26mmHg)において圧測定(対照値)を行い、AChを5用量(10^-8,3^*10^-8,10^-7,3^*10^-7,10^-6M)を順次投与し、各測定を行った。

　全28羽の兎を4群に分け実験を行った。安定した肺高血圧の状態で圧測定(対照値)を行い、次にACh(2^*10^-7M)投与により生じた肺血管拡張作用に対して生埋食塩水もしくは3種類の選択的ムスカリンレセプタ拮抗薬を6分間隔で順次4回投与を行い、その拮抗作用を検討した。肺血管拡張作用に個体差が存在する為、肺動脈側に及ぼす影響に関しては拮抗薬投与による肺動脈側抵抗値の増加分(B₂)をACh投与による減少分(B₁)で除したB₂/B₁比を用いて評価した。肺静脈側においては抵抗値(mmHg/l/min)で評価した。

　3.1.生理食塩水群(生食)(n＝7)

　生理食塩水(3ml)を6分間隔で4回投与を行った。

　3.2.選択的M1拮抗薬群(ピレンゼピン)(n＝7)

　ピレンゼピン4用量(20nM,100nM,500nM,1000nM)を順次投与した。

　3.3.選択的M2拮抗薬群(メトクトラミン)(n＝7)

　メトクトラミン4用量(100nM,500nM,2500nM,4000nM)を順次投与した。

　3.4.選択的M3拮抗薬群(4-DAMP)(n＝7)

　4-DAMP4用量(0.2nM,1nM,5nM,10nM)を順次投与した。

　全14羽の兎を3群に分け実験を行った。ペースラインの圧測定、及び、検体(灌流液1ml)採取を行った。次にU46619投与による安定した肺高血圧の状態で対照の圧測定及び検体採取を行い、続いて生埋食塩水(3mlを3回)ないしACh2用量(10^-7M及び10^-6M)を6分間隔で投与し、各測定を薬物投与5分後に行った。4-DAMP投与群では、肺高血圧の状態において4-DAMP10nMを投与5分後にACh2用量(10^-7M及び10^-6M)の投与を行った。

　4.1.生食群(n＝3)

　4.2.ACh投与群(n＝5)

　4.3.4-DAMP(10nM)前処置群(n＝8)

　灌流液のnitrate及びnitrite測定は、グリース反応後に540nmの吸光度波長において比色検定を行った。グリース反応には、Cayman Chemical社製のnitrate/mitriteアッセイキットを使用した。

　統計学的検討はstudent’s t検定、及び、分散分析を使用し、P<0.05を有意とした。Stat view4.0(Abacus Concepts社製)を使用し、統計及び計算処理を行った。

　U46619投与により総肺血管抵抗は有意に上昇した。肺動脈側抵抗値及び肺静脈側抵抗値のいずれも有意に上昇した。さらにACh投与により用量依存性に総肺血管抵抗値の低下を認め10^-7Mで最大拡張効果を認め以後変化は認められなかった。総肺血管抵抗値の低下において肺動脈側抵抗値の有意な減少を認めたが肺静脈側抵抗値には認められなかった。AChによる肺血管拡張作用は主に肺動脈側を拡張し、肺静脈側には影響を及ぼさないことが判明した。

　ACh(10^-7,10^-6M)投与による肺灌流圧減少にともないNO代謝産物の灌流液中濃度は有意に増加した。一方、4-DAMP(10nM)による前処置を行った場合には、ACh投与により肺灌流圧は有意な変化を認めず、NO代謝産物の灌流液中濃度も同様に変化を生じていない。また、生埋食塩水群においては肺灌流圧およびNO代謝産物の灌流液中濃度に関していずれも変化を認めなかった。